本法適用于無菌制劑、原料、輔料及醫(yī)療器械等物品的滅菌。無菌物品是指物品中不含任何活的微生物。然而，對(duì)于任何一批滅菌產(chǎn)品來說，無菌既無法保證也無法用試驗(yàn)來證實(shí)。物理或化學(xué)手段滅菌試驗(yàn)表明：微生物的殺滅遵循對(duì)數(shù)規(guī)則，因此，已滅菌物品的無菌標(biāo)準(zhǔn)一般以物品滅菌后微生物存活的概率-無菌保證水平SAL (Sterility Assurance Level)表示。zui終滅菌產(chǎn)品微生物存活的概率不得高于10-6。已滅菌產(chǎn)品達(dá)到的無菌保證水平可通過驗(yàn)證確定。

 

滅菌產(chǎn)品的無菌保證并不能依賴于zui終產(chǎn)品的無菌檢驗(yàn)，而是取決于生產(chǎn)過程中采用合格的滅菌工藝、嚴(yán)格的GMP管理和良好的全面質(zhì)量保證體系。滅菌工藝的確定應(yīng)綜合考慮被滅菌物品的性質(zhì)、滅菌方法的有效性和經(jīng)濟(jì)性、滅菌后物品的完整性和穩(wěn)定性等因素。滅菌程序的驗(yàn)證是無菌保證的必要條件。滅菌程序經(jīng)驗(yàn)證后，方可交付正式使用。

驗(yàn)證內(nèi)容包括： 

⑴撰寫驗(yàn)證方案及制定評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。

⑵確認(rèn)滅菌設(shè)備技術(shù)資料齊全、安裝正確,并能處于正常運(yùn)行（安裝確認(rèn)）。 

⑶確認(rèn)關(guān)鍵控制設(shè)備和儀表能在規(guī)定的參數(shù)范圍內(nèi)正常運(yùn)行（運(yùn)行確認(rèn)）。 

⑷采用滅菌物品或模擬物品進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，確認(rèn)滅菌效果符合規(guī)定（性能確認(rèn)）。 

⑸匯總并完善各種文件和記錄，撰寫驗(yàn)證報(bào)告。

日常生產(chǎn)中，應(yīng)對(duì)滅菌程序的運(yùn)行情況進(jìn)行監(jiān)控，確認(rèn)關(guān)鍵參數(shù)（如溫度、壓力、時(shí)間、濕度、滅菌氣體濃度及吸收的輻照吸收劑量等）均在驗(yàn)證確定的范圍內(nèi)。

 

滅菌程序應(yīng)定期進(jìn)行再驗(yàn)證。當(dāng)滅菌程序發(fā)生變更（包括滅菌物品裝載方式和數(shù)量的改變）時(shí)，應(yīng)進(jìn)行再驗(yàn)證。產(chǎn)品的無菌保證與滅菌前產(chǎn)品被污染的程度及污染菌的特性相關(guān)。因此，應(yīng)嚴(yán)格監(jiān)控被滅菌品滅菌前的微生物污染水平及污染菌的耐受性，并在生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)采取各種措施降低污染，確保微生物污染控制在規(guī)定的限度內(nèi)。滅菌后，應(yīng)防止已滅菌物品被再次污染。任何情況下，都應(yīng)要求容器及其密封系統(tǒng)確保產(chǎn)品在有效期內(nèi)符合無菌要求。 滅 菌 方 法 常用的滅菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、氣體滅菌法、輻射滅菌法和過濾除菌法。可根據(jù)被滅菌物品的特性采用一種或多種方法組合滅菌。只要產(chǎn)品允許，應(yīng)盡可能選用zui終滅菌法（即產(chǎn)品分裝至包裝容器后再滅菌）滅菌。若產(chǎn)品不適合采用zui終滅菌法，可選用過濾除菌法或無菌生產(chǎn)工藝達(dá)到無菌保證要求，只要可能，應(yīng)對(duì)非zui終滅菌的產(chǎn)品作補(bǔ)充性滅菌處理（如流通蒸汽滅菌）。

 

 

一、濕熱滅菌法

 

本法系指將物品置于滅菌柜內(nèi)利用高壓飽和蒸汽、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法 。該法滅菌能力強(qiáng)，為熱力滅菌中zui有效、應(yīng)用zui廣泛的滅菌方法。藥品、容器、培養(yǎng)基、無菌衣、膠塞以及其它遇高溫和潮濕不發(fā)生變化或損壞的物品，均可用本法滅菌。流通蒸汽不能*殺滅細(xì)菌孢子，一般可作為不耐熱無菌產(chǎn)品的輔助滅菌手段。

 

濕熱滅菌條件通常采用121℃×20min或116℃×40min的程序，也可采用其它溫度和時(shí)間參數(shù)?？傊?，必須保證物品滅菌后的SAL≤10-6。對(duì)熱穩(wěn)定的物品，可采用過度殺滅法，其SAL應(yīng)≤10-12。熱敏感產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間F0可低于8min，但應(yīng)在生產(chǎn)全過程中，對(duì)產(chǎn)品中污染的微生物嚴(yán)加監(jiān)控，并采取各種措施防止耐熱菌污染及降低微生物污染水平，確保被滅菌產(chǎn)品達(dá)到無菌保證要求。

 

采用濕熱滅菌時(shí)，被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)陌b和裝載方式，保證滅菌的有效性和均一性。

 

濕熱滅菌工藝驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)進(jìn)行熱分布試驗(yàn)、熱穿透試驗(yàn)和生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)。以確定滅菌柜空載及不同裝載時(shí)腔室中的熱分布狀況及可能存在的冷點(diǎn)；在空載條件下，確認(rèn)121℃時(shí)腔室各點(diǎn)的溫度差值應(yīng)≤±1℃；使用插入實(shí)際物品或模擬物品內(nèi)的溫度探頭，確認(rèn)滅菌柜在不同裝載時(shí)，zui冷點(diǎn)物品的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間（F0）達(dá)到設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)；用生物指示劑進(jìn)一步確認(rèn)在不同裝載時(shí)冷點(diǎn)處的滅菌物品達(dá)到無菌保證水平。本法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus)。

 

 

二、干熱滅菌法

 

本法系指物品于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設(shè)備中、利用干熱空氣達(dá)到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的方法。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品的滅菌，如玻璃器具、金屬制容器、纖維制品、固體試藥、液狀石蠟等均可采用本法滅菌。

 

干熱滅菌條件一般為160～170℃×120min以上、170～180℃×60min以上或250℃×45min以上，也可采用其它溫度和時(shí)間參數(shù)?？傊?，應(yīng)保證滅菌后的產(chǎn)品其SAL≤10-6。干熱過度殺滅后產(chǎn)品的SAL應(yīng)≤10-12，此時(shí)物品一般無需進(jìn)行滅菌前污染微生物的測(cè)定。250℃ 45min的干熱滅菌也可除去無菌產(chǎn)品包裝容器及有關(guān)生產(chǎn)灌裝用具中的熱原物質(zhì)。

 

采用干熱滅菌時(shí)，被滅菌物品應(yīng)有適當(dāng)?shù)陌b和裝載方式，保證滅菌的有效性和均一性。

 

干熱滅菌法驗(yàn)證與濕熱滅菌法相同，應(yīng)進(jìn)行熱分布試驗(yàn)、熱穿透試驗(yàn)、生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)或細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)。以確認(rèn)滅菌柜中的溫度分布符合設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)、確定zui冷點(diǎn)位置、確認(rèn)zui冷點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間（FH）能達(dá)到設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)并達(dá)到SAL要求。常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis)。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)是證明除熱原過程有效性的試驗(yàn)。一般將不小于1000單位的細(xì)菌內(nèi)毒素加入待去熱原的物品中，證明該去熱原工藝能使內(nèi)毒素至少下降3個(gè)對(duì)數(shù)單位。細(xì)菌內(nèi)毒素滅活驗(yàn)證試驗(yàn)所用的細(xì)菌內(nèi)毒素一般為大腸桿菌內(nèi)毒素（Escherichia coli endoxin）。驗(yàn)證時(shí)，一般采用zui大裝載方式。

 

 

三、輻射滅菌法

 

本法系指將滅菌產(chǎn)品置于適宜放射源輻射的γ射線或適宜的電子加速器發(fā)生的電子束中進(jìn)行電離輻射而達(dá)到殺滅微生物的方法。本法zui常用的為60Co-γ射線輻射滅菌。醫(yī)療器械、容器、生產(chǎn)輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。

 

采用輻射滅菌法滅菌的無菌產(chǎn)品其SAL應(yīng)≤10-6。γ射線輻射滅菌所控的參數(shù)主要是輻射劑量（指滅菌物品的吸收劑量）。該劑量的制定應(yīng)考慮滅菌物品的適應(yīng)性及可能污染的微生物zui大數(shù)量及zui強(qiáng)抗輻射力，所使用的劑量事先應(yīng)驗(yàn)證其有效性及安全性。常用的輻射滅菌吸收劑量為25kGy。對(duì)zui終產(chǎn)品、原料藥、某些醫(yī)療器材應(yīng)盡可能采用低輻射劑量滅菌。滅菌前，應(yīng)對(duì)被滅菌物品微生物污染的數(shù)量和抗輻射強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定，以評(píng)價(jià)滅菌過程賦予該滅菌物品的無菌保證水平。

 

滅菌時(shí)，應(yīng)采用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)或物理方法對(duì)滅菌物品吸收的輻射劑量進(jìn)行監(jiān)控，以充分證實(shí)滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)定的限度內(nèi)。如采用與滅菌物品一起被輻射的放射性劑量計(jì)，劑量計(jì)要置于規(guī)定的部位。在初安裝時(shí)劑量計(jì)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)源進(jìn)行校正，并定期進(jìn)行再校正。

 

60Co-γ射線輻射滅菌法驗(yàn)證時(shí)，除進(jìn)行生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)外，還應(yīng)確認(rèn)空載和裝載時(shí)滅菌腔內(nèi)的輻射劑量的分布圖、滅菌物品的吸收劑量及zui大和zui小吸收劑量的分布、滅菌物品的均一性、滅菌腔內(nèi)物品的裝載方式等。常用的生物指示劑為短小芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus pumilus)。

 

 

四、氣體滅菌法

 

本法系指用化學(xué)消毒劑形成的氣體殺滅微生物的方法。在充有滅菌氣體的高壓腔室內(nèi)進(jìn)行。常用的化學(xué)消毒劑有環(huán)氧乙烷、氣態(tài)過氧化氫、甲醛、臭氧（O3）等，本法適用于在氣體中穩(wěn)定的物品滅菌。采用氣體滅菌法時(shí)，應(yīng)注意滅菌氣體的可燃可爆性、致畸性和殘留毒性。

 

本法中zui常用的氣體是環(huán)氧乙烷，一般與80％～90％的惰性氣體混合使用。該法可用于醫(yī)療器械，塑料制品等不能采用高溫滅菌的物品滅菌。含氯的物品及能吸附環(huán)氧乙烷的物品則不宜使用。另外，使用氣態(tài)過氧化氫和臭氧（O3）滅菌，因其無危害性殘留物，不會(huì)對(duì)操作人員和環(huán)境造成危害，適合于空間和物品表面的滅菌。

 

采用環(huán)氧乙烷滅菌時(shí)，滅菌柜內(nèi)的溫度、濕度、滅菌氣體濃度、滅菌時(shí)間是影響滅菌效果的重要因數(shù)。可采用下列滅菌條件：

 

溫度 （ 54 ±10）℃

 

相對(duì)濕度 （60±10）%

 

滅菌壓力 8×105Pa

 

滅菌時(shí)間 90min

 

滅菌條件應(yīng)予驗(yàn)證。滅菌時(shí)，先將滅菌腔室先抽成真空，然后通入蒸汽使腔室內(nèi)達(dá)到設(shè)定的

 

溫濕度平衡的額定值，再通入經(jīng)過濾和預(yù)熱的環(huán)氧乙烷氣體。滅菌過程中，應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控腔室的溫度、濕度、壓力、環(huán)氧乙烷濃度及滅菌時(shí)間。必要時(shí)使用生物指示劑監(jiān)控滅菌效果。本法滅菌程序的控制具有一定難度，整個(gè)滅菌過程應(yīng)在技術(shù)熟練人員的監(jiān)督下進(jìn)行。滅菌后，應(yīng)采取新鮮空氣置換，使殘留環(huán)氧乙烷和其他易揮發(fā)性殘?jiān)?。并?duì)環(huán)氧乙烷殘留物和反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行監(jiān)控，以證明其不超過規(guī)定濃度，避免產(chǎn)生毒性。

 

環(huán)氧乙烷滅菌法驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)進(jìn)行如下試驗(yàn)：泄漏試驗(yàn)，以確認(rèn)滅菌腔室的密閉性；生物指示劑的驗(yàn)證試驗(yàn)，指示劑一般采用枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis)；滅菌后換氣次數(shù)的驗(yàn)證試驗(yàn)，確認(rèn)環(huán)氧乙烷及相應(yīng)的反應(yīng)產(chǎn)物含量在限定的范圍內(nèi)。驗(yàn)證設(shè)計(jì)時(shí)，還應(yīng)考慮物品包裝材料和滅菌腔室中物品的排列方式對(duì)滅菌氣體的擴(kuò)散和滲透的影響。

 

 

五、過濾除菌法

 

本法系利用細(xì)菌不能通過致密具孔濾材的原理以除去氣體或液體中微生物的方法。常用于熱不穩(wěn)定的藥品溶液或原料的除菌。

 

除菌過濾器采用孔徑分布均勻的微孔濾膜作過濾材料，微孔濾膜分親水性和疏水性兩種。濾膜材質(zhì)依過濾物品的性質(zhì)及過濾目的而定。藥品生產(chǎn)中采用的除菌濾膜孔徑一般不超過0.22μm。過濾器不得對(duì)被濾過成分有吸附作用，也不能釋放物質(zhì)，不得有纖維脫落，禁用含石棉的過濾器。濾器和濾膜在使用前應(yīng)進(jìn)行潔凈處理，并用高壓蒸汽進(jìn)行滅菌或作在線滅菌。更換品種和批次應(yīng)先清洗濾器，再更換濾膜。

 

過濾過程中無菌保證與過濾液體的初始生物負(fù)荷及過濾器的對(duì)數(shù)下降值LRV(Log Reduction Value)有關(guān)。LRV系指規(guī)定條件下，被過濾液體過濾前的微生物數(shù)量與過濾后的微生物數(shù)量比的常用對(duì)數(shù)值。

 

即： LRV=lgN0- LgN 式中N0為產(chǎn)品除菌前的微生物數(shù)量。 N 為產(chǎn)品除菌后的微生物數(shù)量。

 

LRV用于表示過濾器的過濾除菌效率，對(duì)孔徑為0.22μm的過濾器而言，要求每1cm2有效過濾面積的LRV應(yīng)不小于7。因此過濾除菌時(shí)，被過濾產(chǎn)品總的污染量應(yīng)控制在規(guī)定的限度內(nèi)。為保證過濾除菌效果，可使用兩個(gè)過濾器串連過濾，或在灌裝前用過濾器進(jìn)行再次過濾。

 

在過濾除菌中，一般無法對(duì)全過程中過濾器的關(guān)鍵參數(shù)（濾膜孔徑的大小及分布，濾膜的完整性及LRV）進(jìn)行監(jiān)控。因此，在每一次過濾除菌前后均應(yīng)作濾器的完整性試驗(yàn)，即氣泡點(diǎn)試驗(yàn)或壓力維持試驗(yàn)或氣體擴(kuò)散流量試驗(yàn)。確認(rèn)濾膜在除菌過濾過程中的有效性和完整性。除菌過濾器的使用時(shí)間不應(yīng)超過一個(gè)工作日，否則應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。

 

過濾系統(tǒng)的驗(yàn)證包括過濾系統(tǒng)對(duì)過濾液體的適應(yīng)性、過濾材料對(duì)溶液的污染程度、過濾器的規(guī)格、過濾器的滅菌方法、過濾系統(tǒng)的完整性試驗(yàn)、生物指示劑試驗(yàn)、過濾液體的微生物含量控制及過濾時(shí)間、過濾器的使用壽命等。上述試驗(yàn)大部分可由濾器的生產(chǎn)廠商來進(jìn)行。微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)常用的生物指示劑為缺陷假單胞菌(Pseudomonas diminuta)。

 

通過過濾除菌法達(dá)到無菌的產(chǎn)品應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控其生產(chǎn)環(huán)境的潔凈度，建議在無菌環(huán)境下進(jìn)行過濾操作。相關(guān)的設(shè)備、包裝容器、塞子及其它物品應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行滅菌，并防止再污染。

 

六、無菌生產(chǎn)工藝

 

無菌生產(chǎn)工藝系指必須在無菌控制條件下生產(chǎn)無菌制劑的方法，無菌分裝及無菌凍干是zui常見的無菌生產(chǎn)工藝。后者在工藝過程中須采用過濾除菌法。

 

無菌生產(chǎn)工藝應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控其生產(chǎn)環(huán)境的潔凈度，并應(yīng)在無菌控制的環(huán)境下進(jìn)行過濾操作。相關(guān)的設(shè)備、包裝容器、塞子及其它物品應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行滅菌，并防止被再次污染。

 

無菌生產(chǎn)工藝過程的無菌保證應(yīng)通過培養(yǎng)基無菌灌裝摸擬試驗(yàn)驗(yàn)證，試驗(yàn)結(jié)果的陽(yáng)性率不得超過0.1%(置信度取95%)。在生產(chǎn)過程中，應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控生產(chǎn)環(huán)境的無菌空氣質(zhì)量、操作人員的素質(zhì)、各物品的無菌性。

 

無菌生產(chǎn)工藝應(yīng)定期進(jìn)行驗(yàn)證，包括對(duì)環(huán)境空氣過濾系統(tǒng)有效性驗(yàn)證及培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。

 

生物指示劑

 

生物指示劑系一類特殊的活微生物制品?？捎糜诖_認(rèn)滅菌設(shè)備的性能、滅菌程序的驗(yàn)證、生產(chǎn)過程滅菌效果的監(jiān)控等。用于滅菌驗(yàn)證中的生物指示劑一般是細(xì)菌的孢子。

 

手提式滅菌器的性能特點(diǎn)：

全不銹鋼材料制成，經(jīng)久耐用；

座式結(jié)構(gòu)，放置穩(wěn)定；

設(shè)有定時(shí)開關(guān)，保溫時(shí)間控制，操作方便；

膠木星形螺桿，操作時(shí)不燙手；

設(shè)有放水，方便排放濃縮水；

壓力表同時(shí)顯示器內(nèi)壓力和溫度，清晰明了；

安全閥自動(dòng)控制壓力和滅菌溫度，安全可靠；

放汽閥可以排盡桶內(nèi)冷空氣和冷凝水；

徑向自脹覆蓋結(jié)構(gòu)，操作簡(jiǎn)便省力；

自脹式硅橡膠密封圈，密封效果好，使用壽命長(zhǎng)。